期刊简介
本学报是由南京军区联勤部卫生部主管，南京军区南京总院主办的以刊登医学研究生论文为特色的学术期刊，月刊。重点报道各高等医学院校、各医学研究所、各临床学院和附属医院研究生的课题研究成果和经验。设有专家论坛（以约稿为主）、论著、文献综述、经验荟萃、医院管理、护理等栏目。
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首页>医学研究生学报杂志
- 杂志名称：医学研究生学报杂志
- 主管单位：南京军区联勤部卫生部
- 主办单位：南京军区南京总医院
- 国际刊号：1008-8199
- 国内刊号：32-1574/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：第一、三届全军医学期刊优秀编辑奖期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
胱天蛋白酶募集域蛋白9-麦芽糖结合蛋白融合蛋白的原核表达及纯化
邓东灵；孔庆涛；胡青原；刘海波；魏天彪；黄善青；陈浩；桑红
关键词：胱天蛋白酶募集域蛋白9, 原核表达, MBP麦芽糖层析柱, 分子筛层析
摘要：目的 胱天蛋白酶募集域蛋白9(CARD9)可激活核因子-κB(NF-κB)、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)等通路参与免疫,但其作用机制至今尚未阐明.为进行相关体外实验,构建CARD9-麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白的原核表达载体,并对融合蛋白进行表达鉴定及纯化.方法 利用PCR技术分别扩增CARD9和MBP基因的编码序列,将两者正确插入pET-30a(+)载体中得到重组质粒,后转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞中,并进行PCR和酶切鉴定以及基因测序.将正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,筛选不同条件进行IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE电泳检测目的蛋白质的相对分子质量.通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱对CARD9-MBP融合蛋白进行纯化,用HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后进行MALDI-TOF质谱鉴定.结果 成功构建CARD9-MBP融合蛋白的原核表达载体,PCR和酶切鉴定为阳性且基因测序结果与目的序列一致.SDS-PAGE电泳显示,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功诱导表达出相对分子质量约为105000的目的蛋白.通过MBP麦芽糖层析柱的初步纯化后,可得到相对较纯的融合目的蛋白,经HRV3C蛋白酶酶切去除MBP标签后行MALDI-TOF质谱鉴定其确为CARD9蛋白.后期通过分子筛层析柱进一步纯化得到了更纯的CARD9-MBP融合蛋白.结论 成功构建了重组CARD9-MBP融合蛋白的原核表达载体,并进行了大量可溶性表达.通过MBP麦芽糖层析柱和分子筛层析柱的纯化,可得到较纯的目的蛋白.
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