蛋白质精氨酸甲基转移酶5对人卵巢癌HO8910细胞增殖能力的影响

摘要：目的 蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)可通过表观遗传或翻译后甲基化修饰的方式参与众多的生物学调控.文中旨在探讨PRMT5对卵巢癌HO8910细胞增殖能力的影响. 方法 利用瞬时转染的方法获得PRMT5过表达的HO8910细胞株,分为空白对照组(野生型HO8910细胞株)、阴性对照组(转染pCMV-myc质粒的HO8910细胞)、实验组(转染pCMV-myc-PRMT5质粒的HO8910细胞). Western blot检测3组细胞标签蛋白myc的表达,qRT-PCR检测3组细胞PRMT5 mRNA的表达.另利用shRNA干扰方法建立诱导型稳定敲低PRMT5基因的HO8910细胞株,分为pLKO对照组(感染空载体慢病毒)、pLKO+Dox(100 ng/mL)组、shPRMT5组(感染PRMT5-shRNA慢病毒组)和shPRMT5+Dox(100 ng/mL)组.用不同浓度梯度的Dox诱导敲低(Dox 0 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL)48 h,Western blot、qRT-PCR检测PRMT5的蛋白和mRNA的表达.克隆形成实验、EdU实验、CCK-8实验检测细胞增殖能力;实验细胞分为Dox-组、Dox+组、pCMV-myc组、pCMV-myc-PRMT5组. Western blot检测细胞PRMT5的表达对增殖相关蛋白的影响. 结果 Western blot结果显示,空白对照组和阴性对照组均无标签蛋白myc的表达,而实验组检测到myc的表达,qRT-PCR检测实验组PRMT5 mRNA表达远高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01).与pLKO对照组细胞中PRMT5的蛋白表达水平(1.05±0.11)比较,shPRMT5+Dox组(0.32±0.25)和shPRMT5组PRMT5的蛋白表达(0.89±0.18)显著减少(P<0.05). qRT-PCR结果同样显示,shPRMT5+Dox较shPRMT5组PRMT5 mRNA表达显著降低(P<0.01). Western blot和qRT-PCR证实PRMT5在用Dox 10 ng/mL(0.21±0.24)和100 ng/mL (0.08±0.15)诱导后相较于无Dox处理显著下调(P<0. 05). Dox-组细胞形成的克隆数[(161±15)个]显著高于Dox+组细胞克隆数[(73±8)个],差异具有统计学意义(P<0.01). pCMV-myc-PRMT5组克隆数[(193±15)个]明显高于pCMV-myc组克隆数[(102±12)个],差异有统计学意义(P<0.01). Dox-组正在进行DNA复制的细胞数[(35±10)个]明显高于Dox+组[(16± 8)个],差异具有统计学意义(P<0.05). pCMV-myc-PRMT5组正在进行 DNA复制的细胞数[(46±8)个]显著高于 pCMV-myc组[(24±8)个],差异有统计学意义(P<0.05). CCK-8结果显示,细胞铺板第4天以后Dox+组细胞增殖率显著低于Dox-组( P<0.05) . pCMV-myc-PRMT5组细胞的增殖率从第4天也显著高于对应天数的pCMV-myc组( P<0.05) . 结论 PRMT5对卵巢癌细胞的增殖能力有重要作用.下调PRMT5可以抑制细胞的增殖能力,而上调 PRMT5促进细胞的增殖能力.