苯肾上腺素对心肌细胞前体心房钠尿肽和前体脑钠肽表达的影响及其与相关信号通路的关系

摘要：目的 α1肾上腺素能受体(α1-AR)介导的交感神经通路与心肌重构及纤维化病理过程中的心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽(BNP)表达及其活性调节密切相关.文章观察α1-AR激动剂苯肾上腺素(PE)对ANP、BNP表达的影响,初步探讨作用机制及其与钙调神经磷酸酶-T细胞转录活化因子3(CaN-NFATc3)、丝裂原活化蛋白激酶MEK3-丝裂原活化蛋白激酶P38(MEK3-P38 MAPK)相关信号通路的关系.方法 体外分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞(CMs),细胞培养72 h后分为5组进行实验:对照组、PE组、Praz+PE组、CsA+PE组、SB203580+PE组.其中预处理组中CsA、Praz以及SB203580先单独孵育细胞1 h,后用PE(50μmol/L)继续作用5 h,共6 h;PE组仅用单药持续处理6 h.药物处理后,镜下观察心肌细胞状态,并运用锥虫蓝计数及MTT法测定各组CMs增殖,比色法测定干预后的各组心肌细胞活力;低温裂解细胞提取细胞蛋白,运用免疫印迹法定量测定前体钠尿肽(proANP)、前体脑钠肽(proBNP)、CaN及p-P38MAPK蛋白在各组细胞中的表达;以ELISA法测定各组细胞NFATc3、MEK3蛋白含量.结果 Praz+PE组细胞排列稀疏,细胞核固缩,光镜下未见细胞规律跳动,状态较差;CsA+PE组细胞异形化,边缘光亮,细胞呈纤维条索状;SB203580+PE组细胞细胞质淡染,细胞核少量碎片化,换液时可见较多漂浮死亡细胞.与对照组相比,除PE组的A值(0.78±0.09)上调外,Praz+PE组、CsA+PE组、SB203580+PE组(0.31±0.09、0.47±0.12、0.42±0.14)心肌细胞活力均有不同水平下降(P<0.05);Praz+PE组、CsA+PE组、SB203580+PE组较PE组减低(P<0.05);CsA+PE组、SB203580+PE组较Praz+PE组升高(P<0.05).与对照组比较,PE组心肌细胞ProANP、ProBNP的表达明显升高(P<0.01),而Praz+PE组、CsA+PE组和SB203580+PE组中表达均被不同程度抑制(P<0.05);与PE组相比,Praz+PE组、CsA+PE组和SB203580+PE组中表达均明显减低(P<0.05);CsA+PE组和SB203580+PE组均较Praz+PE组表达升高(P<0.05).与对照组相比,PE组中CaN、p-P38表达升高(P<0.05),而Praz+PE组、CsA+PE组及SB203580+PE组表达均有不同程度减低(P<0.05);Praz+PE组、CsA+PE组、SB203580+PE表达均较PE组明显减弱(P<0.05);CsA+PE组及SB203580+PE组中CaN的表达较Praz+PE组不同程度上调(P<0.05);CsA+PE组中p-P38的表达较Praz+PE组升高(P<0.05).相较于对照组,PE组表达NFATc3、MEK3有较明显增高(P<0.05),而Praz+PE组、CsA+PE组和SB203580+PE组表达均下调(P<0.05);Praz+PE组、CsA+PE组、SB203580+PE组较PE组均明显减弱(P<0.05);CsA+PE组、SB203580+PE组较Praz+PE组明显升高(P<0.05).结论 PE可诱导激活体外心肌细胞中有关ANP、BNP合成的信号通路;CaN-NFATc3及MEK3-P38相关的信号通路可能参与α1-AR介导的心肌细胞ANP、BNP的分泌.