鞘氨醇-1-磷酸转运体在胃癌组织的表达及其对胃癌细胞增殖和迁移的影响

摘要：目的 鞘氨醇-1-磷酸转运体(Spns2)与肿瘤相关研究报道较少.文中旨在比较Spns2在胃癌和癌旁组织中的表达,并探讨Spns2对人胃癌细胞SGC-7901增殖、克隆形成和迁移能力的影响.方法 收集2016年2月至8月江苏省肿瘤医院消化内科胃癌术后病理标本20对(癌组织和癌旁组织).通过免疫组化法比较Spns2蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达差异.构建过表达Spns2的pEX-1真核载体和小干扰RNA(siRNA),转染人胃癌SGC-7901细胞,根据转染的质粒载体不同分2组:pEX-1-Spns2组(转染pEX-1-Spns2真核表达载体)、pEX-1组(转染空载体pEX-1).进行siRNA制备与转染,根据转染的siRNA不同分2组:siRNA-Spns2组(加入针对Spns2的脂质体介导的siRNA)、siRNA-NC组(加入不与人任何基因序列同源的siRNA).采用RT-PCR和Western blot分别检测转染后各组Spns2 mRNA和蛋白的表达水平;采用CCK-8、克隆形成实验、Transwell小室和划痕实验检测Spns2过表达和下调对SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力的影响.结果 胃癌组织Spns2蛋白表达(0.39±0.04)明显低于癌旁组织(0.45±0.02),差异有统计学意义(P<0.05).pEX-1-Spns2组Spns2 mRNA(21.96±2.08)、蛋白表达(10.71±2.78)较pEX-1组[(0.88±0.12)、(0.83±0.16)]明显升高(P<0.05).siRNA-Spns2组Spns2 mRNA(0.35±0.07)、蛋白表达(0.53±0.07)较siRNA-NC组[(0.91±0.09)、(0.92±0.08)]明显降低(P<0.05).转染后第48、72、96小时,pEX-1-Spns2组SGC-7901细胞增殖能力较pEX-1组明显降低(P<0.05).siRNA-Spns2组SGC-7901细胞增殖能力较siRNA-NC组明显增强(P<0.05).pEX-1-Spns2组克隆形成率较pEX-1组明显降低[(33.30±3.81)％vs(48.00±4.60)％],差异有统计学意义(P<0.05).siRNA-Spns2组克隆形成率较siRNA-NC组明显升高[(48.38±4.22)％vs(26.25±4.88)％],差异有统计学意义(P<0.05).pEX-1-Spns2组穿膜细胞数明显低于pEX-1组;siRNA-Spns2组穿膜细胞数则明显高于siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05).pEX-1-Spns2组细胞迁移率较pEX-1组降低[(1.60±0.19)％vs(3.25±0.37)％],siRNA-Spns2组较siRNA-NC组升高[(3.16±0.40)％vs(1.41±0.15)％],差异有统计学意义(P<0.05).结论 Spns2在胃癌组织中低表达,过表达Spns2可降低胃癌SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移能力;下调Spns2则可促进胃癌SGC-7901细胞的增殖、克隆形成和迁移,提示Spns2可能起着抑制胃癌发生发展的作用.