抗菌肽 L L-37激活嗜酸性粒细胞释放炎性递质对哮喘的发病机制研究

摘要：目的：抗菌肽LL-37（LL-37）是人源性阳离子抗菌18000多肽（hCAP18）的成熟形式，对哮喘的发病具有一定的调节作用，但具体机制尚不清楚。文中旨在研究LL-37在诱导人嗜酸性粒细胞释放炎性递质中的作用，并探讨其影响哮喘发病的可能机制。方法选取2015年1月至2016年1月攀枝花学院附属医院呼吸科就诊的16例轻度或中度过敏性哮喘患者，16名健康志愿者。从研究对象的外周血中提取原代嗜酸性粒细胞，将细胞分别分为哮喘组和对照组。依据干预嗜酸性粒细胞的方式将哮喘组和健康组细胞分别分为：哮喘a亚组、对照a亚组；哮喘血小板活化因子（ PAF）亚组、对照PAF亚组；哮喘15μg／mL LL-37亚组、对照15μg／mL LL-37亚组；哮喘30μg／mL LL-37亚组、对照30μg／mL LL-37亚组；哮喘IL-5亚组、对照IL-5亚组；哮喘IL-5＋15μg／mL LL-37亚组、对照IL-5＋15μg／mL LL-37亚组；哮喘IL-5＋30μg／mL LL-37亚组、对照IL-5＋30μg／mL LL-37亚组。依据嗜酸性粒细胞中添加抑制剂种类及抗菌肽将哮喘组和健康组细胞分别分为：哮喘b亚组、对照b亚组；哮喘PTX亚组、对照PTX亚组；哮喘WRW4亚组、对照WRW4亚组；哮喘苏拉明亚组、对照苏拉明亚组；哮喘LL-37亚组、对照LL-37亚组；哮喘PTX＋LL-37亚组、对照PTX＋LL-37亚组；哮喘WRW4＋LL-37亚组、对照WRW4＋LL-37亚组；哮喘苏拉明＋LL-37亚组、对照苏拉明＋LL-37亚组。 ELISA检测各组细胞上清的半胱氨酸白三烯（ Cysteinyl leukotrienes ， Cys-LTs）浓度；Western blot 分析健康组细胞内加入 PTX、WRW4后 PLA2、磷酸化 cPLA2、磷酸化 ERK 水平变化以及白三烯刺激后hCAP18水平。结果 LL-37诱导对照组嗜酸性粒细胞15、30 min后，对照30μg／mL LL-37亚组Cys-LTs表达量较对照15μg／mL LL-37亚组均显著升高[（54．02±7．15）pg／105 vs （37．86±6．33）pg／105、（53．30±6．99）pg／105 vs （36．27±6．46）pg／105，P＜0．05]。对照组嗜酸粒细胞中Cys-LTs表达量的比较，对照IL-5＋15μg／mL LL-37亚组[（59．97±6．83）pg／105]、对照IL-5＋30μg／mL LL-37亚组[（81．44±13．70）pg／105]较对照IL-5亚组[（26．18±4．86）pg／105]均明显升高（P＜0．05）。哮喘15μg／mL LL-37亚组、哮喘30μg／mL LL-37亚组Cys-LTs表达量较对照a亚组明显升高（ P＜0．05）。与对照LL-37亚组Cys-LTs表达量比较，对照PTX亚组、对照WRW4亚组、对照苏拉明亚组、对照PTX＋LL-37亚组、对照WRW4＋LL-37亚组显著降低（ P＜0．05）。Western blot结果显示，LL-37刺激嗜酸性粒细胞可促进ERK1／2的活化及磷酸化；当同时使用PTX或WRW4可抵消LL-37诱导的pERK1／2的上调；抑制剂PD处理可阻断LL-37诱导的cPLA2的磷酸化及Cys-LTs的释放；嗜酸性粒细胞中hCAP18表达量比较，哮喘组较对照组升高。结论 LL-37可作为嗜酸性粒细胞激活肽触发炎症介质的释放，通过调节ERK1／2的磷酸化激活cPLA2磷酸化，进而引起Cys-LTs的合成，参与哮喘的发生发展，提示LL-37、hCAP18及其信号通路可作为临床治疗哮喘的潜在靶标。