期刊简介
本学报是由南京军区联勤部卫生部主管，南京军区南京总院主办的以刊登医学研究生论文为特色的学术期刊，月刊。重点报道各高等医学院校、各医学研究所、各临床学院和附属医院研究生的课题研究成果和经验。设有专家论坛（以约稿为主）、论著、文献综述、经验荟萃、医院管理、护理等栏目。
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首页>医学研究生学报杂志
- 杂志名称：医学研究生学报杂志
- 主管单位：南京军区联勤部卫生部
- 主办单位：南京军区南京总医院
- 国际刊号：1008-8199
- 国内刊号：32-1574/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：第一、三届全军医学期刊优秀编辑奖期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
Survivin shRNA 和 APC 片段双基因的载体构建及其在HT-29细胞的表达
袁禧先；段厚羽；曹锋；杜井峰；朱艳丽；程开；杨延涛
关键词：Ht-29, Survivin shRNA, APC有效片段, 双基因, 慢病毒
摘要：目的：研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达，同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA 片段，从其中筛选出一条佳干扰shRNA片段，与APC功能片段（ aa1020-1698）相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组，慢病毒对HT-29进行侵染，观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot 检测 Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果①Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到佳干扰效果的片段为shR-NA3序列。②构建出的shRNA载体经过送序验证比对后，3对shRNA序列与初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光，实验组Survivin相对含量（31．71±1．49）较空载组（100±0）、空白组（95．12±2．15）明显减少（P＜0．05），APC mRNA表达水平较空载组（0±0）、空白组（0．51±0．15）明显增加（P＜0．05）。实验组Survivin蛋白相对含量（0．18±0．01）较空白组（0．24±0．04）、空载组（0．22±0．03）明显减少，APC蛋白表达水平（0．147±0．016）较空白组（0．095±0．012）、空载组（0．108±0．015）明显升高（P＜0．05）。③实验组凋亡相对比值（0．573±0．050）较空白组（0．390±0．040）、空载组（0．407±0．030）明显增加（P＜0．05）。结论成功构建Survivin-shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体，并能够在HT-29结肠癌细胞中成功表达，该双基因共表达载体可为后续利用该载体进行基因治疗的基础实验提供材料。
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