期刊简介
本学报是由南京军区联勤部卫生部主管，南京军区南京总院主办的以刊登医学研究生论文为特色的学术期刊，月刊。重点报道各高等医学院校、各医学研究所、各临床学院和附属医院研究生的课题研究成果和经验。设有专家论坛（以约稿为主）、论著、文献综述、经验荟萃、医院管理、护理等栏目。
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首页>医学研究生学报杂志
- 杂志名称：医学研究生学报杂志
- 主管单位：南京军区联勤部卫生部
- 主办单位：南京军区南京总医院
- 国际刊号：1008-8199
- 国内刊号：32-1574/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：第一、三届全军医学期刊优秀编辑奖期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
C3aR 慢病毒表达载体的构建及在肾小管上皮细胞中的转染实验
郑敬民；尹广；赵文紧；刘志红
关键词：C3aR, 慢病毒, 肾小管上皮细胞, 过表达
摘要：目的：前期研究发现C3aR在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中表达上调，但其在糖尿病肾病中的病理意义未知，且有关肾组织C3aR的确切生理和病理意义亦仍不清楚。文中通过构建C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的肾小管上皮细胞株，为探讨C3aR在肾组织小管上皮细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法根据人C3aR mRNA序列合成人C3aR基因，将其克隆到慢病毒表达载体pLenti6．3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点，构建成C3aR慢病毒表达载体pLen -ti6．3-C3aR-IRES2-EGFP；经测序验证正确后，用构建的慢病毒表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞，包装成C3aR表达重组慢病毒；以C3aR表达重组慢病毒感染人肾小管上皮细胞系HK2，经药物筛选得到杀稻瘟菌素抗性细胞克隆；经荧光定量PCR分析和细胞免疫化学分析，鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株。结果①对构建成的C3aR慢病毒表达载体pLenti6．3-C3aR-IRES2-EGFP进行全序列测序验证显示序列完全正确。②以构建的C3aR慢病毒表达载体和包装质粒（pLP1、pLP2和 pLP／VSVG）共转染293T细胞，48 h后收集细胞培养上清，得到了滴度约为5×108个／mL的慢病毒液。③成功进行了C3aR重组慢病毒对HK2细胞的转染，得到了稳定转染了C3aR重组慢病毒的HK2细胞株HK2-C3aR；基于荧光定量PCR和细胞免疫化学染色的分析证实HK2-C3aR细胞株中C3aR表达水平较HK2非转染对照细胞高（2．33±0．45 vs 1．00±0．09， P＜0．05）。结论成功构建了C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株，为进一步研究C3aR过表达在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型，也为进一步开展C3aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。
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