rHuEPO 对肾间质纤维化过程中炎症因子的影响及其可能作用机制

摘要：目的：临床治疗虽可延缓肾间质纤维化进展，却无法逆转肾功能丧失。探讨重组人促红细胞生成素（ recombi-nant human erythropoietin ， rHuEPO）对肾间质纤维化过程中炎症因子的影响及其可能作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞随机分为7组：空白对照组、rHuEPO对照组（20 U／mL rHuEPO）、清蛋白刺激组（5 mg／mL清蛋白）、5 U／mL rHuEPO干预组（5 mg／mL清蛋白＋5 U／mL rHuEPO）、10 U／mL rHuEPO干预组（5 mg／mL清蛋白＋10 U／mL rHuEPO）、20 U／mL rHuEPO干预组（5 mg／mL清蛋白＋20 U／mL rHuEPO）、Rho激酶抑制组（10μmol／L Y27632＋5 mg／mL清蛋白），各组均作用24 h。观察各组细胞形态的变化；RT-PCR检测各组细胞RhoA、ROCK1 mRNA及白细胞介素-6因子（ interleukin-6， IL-6） mRNA含量水平；ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子（ tumor necrosis factor ， TNF-α）、IL-6蛋白的含量表达。结果空白对照组、rHuEPO干预组显示鹅卵石或者铺路石样形态，清蛋白刺激组表现出细长梭状改变，呈现纤维细胞样外观。5、10、20 U／mL rHuEPO干预组细胞向鹅卵石样复转，Rho激酶抑制组细胞形态呈椭圆形、细胞间隙稍增大；与空白对照组比较，清蛋白刺激组RhoA、ROCK1 mRNA及IL-6 mRNA显著升高（P＜0．05），而5、10、20 U／mL rHuEPO干预组逐渐下调（P＜0．05），且与rHuEPO浓度负相关；与清蛋白刺激组比较，Rho激酶抑制组ROCK1 mRNA、IL-6 mRNA表达下调（P＜0．05），但RhoA mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）。 ELISA结果显示：清蛋白刺激组上清液TNF-α、IL-6蛋白[（1347．54±41．52） ng／L、（884．62±0．73） pg／L]表达较空白对照组[（452．32±33．23） ng／L，（95．12±0．32） pg／L]显著增高（P＜0．05），5、10、20 U／mL rHuEPO干预组、Rho激酶抑制组TNF-α表达[（1003．32±3．42）、（821．32±21．32）、（590．15±7．68）、（488．13±65．03）ng／L）]较清蛋白刺激组[（1347．54±41．52） ng／L]下降（P ＜0．05）、IL-6蛋白表达[（656．68±0．55）、（422．35±0．22）、（217．32±0．35）、（309．49±0．21）pg／L]亦较清蛋白刺激组[（884．62±0．73）pg／L]下降（P＜0．05），5、10、20 U／mL rHuEPO干预组组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 rHuEPO可能通过减少炎症因子的产生来抑制清蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程，其作用机制部分涉及RhoA／ROCK信号通路。