期刊简介
本学报是由南京军区联勤部卫生部主管，南京军区南京总院主办的以刊登医学研究生论文为特色的学术期刊，月刊。重点报道各高等医学院校、各医学研究所、各临床学院和附属医院研究生的课题研究成果和经验。设有专家论坛（以约稿为主）、论著、文献综述、经验荟萃、医院管理、护理等栏目。
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首页>医学研究生学报杂志
- 杂志名称：医学研究生学报杂志
- 主管单位：南京军区联勤部卫生部
- 主办单位：南京军区南京总医院
- 国际刊号：1008-8199
- 国内刊号：32-1574/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：第一、三届全军医学期刊优秀编辑奖期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
不同消化时间对原代心肌细胞的影响
屈双丽；杨晓敏
关键词：原代细胞培养, 心肌细胞, 消化温度, 消化酶, 消化时间
摘要：目的：原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术，为建造心血管疾病相关模型提供了重要的基础保障。文中旨在通过探讨不同消化时间对原代心肌细胞培养的影响，得到一套简便易行并且能获得较高成活率、纯度及活性的原代心肌细胞的培养方法。方法采用单消化酶多次消化心肌组织，根据消化时间分为8 min组和10 min组，差速贴壁法和5-溴-2-脱氧尿苷抑制法获得纯度较高的心肌细胞。光学显微镜下观察心肌细胞形态，记录镜下不同区域心肌细胞搏动频率测定细胞活力。用台盼蓝染色法检测培养细胞的存活率，横纹肌肌动蛋白鉴定心肌细胞。后建立心肌细胞肥大模型，比较实验组（血管紧张素Ⅱ）和对照组[10％FBS DMEM （ H＋）培养基]的细胞截面平均面积。结果与8 min组比较，10 min组原代心肌细胞大部分伸出伪足相互接触交织成网，逐渐形成细胞簇，立体感明显，细胞搏动及收缩更为明显而有力。分离纯化后原代心肌细胞的平均存活率均＞90％，10 min组平均存活率显著高于8 min组[（95．4±0．8）％sv （93．0±0．8）％，P＜0．05]。α-actin免疫细胞化学染色鉴定，8 min组和10 min组原代心肌细胞的阳性率均＞95％。血管紧张素Ⅱ作用48 h后，10 min组原代心肌细胞实验组心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide， ANP）、细胞截面平均面积较对照组表达均显著升高[（20．8±0．7） vs （15．8±0．5），（34．77±8．43）μm2 vs （14．11±4．29）μm2，P＜0．05]，而消化时间为8 min的原心肌细胞截面平均面积和ANP值未见显著变化。结论采用消化时间为8 min的原代心肌细胞培养方法具有简便、省时、易操作等特点，重要的是能够获得较高质量的心肌细胞。
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