期刊简介
本学报是由南京军区联勤部卫生部主管，南京军区南京总院主办的以刊登医学研究生论文为特色的学术期刊，月刊。重点报道各高等医学院校、各医学研究所、各临床学院和附属医院研究生的课题研究成果和经验。设有专家论坛（以约稿为主）、论著、文献综述、经验荟萃、医院管理、护理等栏目。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
-
2019
首页>医学研究生学报杂志
- 杂志名称：医学研究生学报杂志
- 主管单位：南京军区联勤部卫生部
- 主办单位：南京军区南京总医院
- 国际刊号：1008-8199
- 国内刊号：32-1574/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：第一、三届全军医学期刊优秀编辑奖期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
ALKBH2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
龚隽；葛京平；杨斌；孙颖浩
关键词：RNA干扰, ALKBH2基因, 慢病毒
摘要：目的 ALKBH2基因高表达于尿路上皮肿瘤,RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术难以稳定均一性的下调靶基因.文中旨在构建人源ABH2基因shRNA干扰慢病毒表达载体并进行鉴定. 方法 选取ABH2基因,分析该基因的编码区序列,进行单链oligo的设计及合成,利用PCR对合成的oligo进行拼接反应,将合成好的序列装入pcDNA3.1(+)载体并转化至感受态细胞DH5α,测序鉴定重组克隆中基因序列后构建表达载体pcDNA3.1(+)/ABH2.根据不同的载体分为4组:siRNA-468组、siRNA-571组、siRNA-662组和对照组.根据靶基因序列设计并合成3对shRNA,构建入U6载体.将shRNA载体分别与表达载体共转染人HEK293细胞,通过QPCR检测筛选出优干扰序列.将筛选到有效的shRNA-571干扰序列构建人慢病毒载体pL/shRNA/F载体,用构建的慢病毒干扰载体和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度.将LV-shRNA-571与过表达载体pcDNA3.1(+)/ABH2共转染肾癌细胞株ACHN,通过QPCR鉴定干扰效果. 结果 克隆测序验证无误,慢病毒载体构建成功.转染实验48h后,收集293细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为1.1×10sTU/mL.对照组ABH2mRNA相对表达量为0.785 ±0.082,siRNA-571组为0.078 ±0.006,RNAi后ABH2基因的mRNA表达水平(0.078 ±0.006)与对照组(0.785 ±0.082)相比显著降低(P＜0.01),慢病毒PL/shRNA/F-ALKBH2-571对目的基因ABH2的干扰效率为92.2％. 结论 成功构建ABH2基因RNAi慢病毒载体并得到鉴定.
友情链接