期刊简介
本学报是由南京军区联勤部卫生部主管，南京军区南京总院主办的以刊登医学研究生论文为特色的学术期刊，月刊。重点报道各高等医学院校、各医学研究所、各临床学院和附属医院研究生的课题研究成果和经验。设有专家论坛（以约稿为主）、论著、文献综述、经验荟萃、医院管理、护理等栏目。
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首页>医学研究生学报杂志
- 杂志名称：医学研究生学报杂志
- 主管单位：南京军区联勤部卫生部
- 主办单位：南京军区南京总医院
- 国际刊号：1008-8199
- 国内刊号：32-1574/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：第一、三届全军医学期刊优秀编辑奖期刊收录：万方收录(中), 知网收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏
人Notch4基因RNAi慢病毒载体的构建及鉴定
陈伟；曹罡；董震；苏寒；蒋勇；张森林
关键词：Notch4, 慢病毒载体, RNA干扰
摘要：目的 涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是涎腺常见的恶性肿瘤,Notch4基因与SACC的发生、转移有关.文中构建人Notch4基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并鉴定.方法 针对人Notch4基因序列,按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列,通过限制性内切酶MIu l 和CIa l 双酶切、T4 DNA连接酶连接,将Notch4插入慢病毒载体pLenOR-THM,构建pLenOR-THM-Notch4重组载体.质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒4质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度、观察感染效率.各组病毒载体转染ACC-M细胞后,用QRT-PCR和Western blot检测Notch4基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 成功构建慢病毒表达载体pLenOR-THM-Notch4,4质粒共转染293T细胞后可见大量绿色荧光.浓缩病毒后测定其滴度为6.2×108TU/ml.以复感染系数MOI(multiplicity of infection)为1感染293T细胞,感染效率在90%以上.结合QRT-PCR和Western blot检测结果,第2组慢病毒载体干扰效果佳.结论 成功构建并鉴定人Notch4 RNAi慢病毒表达载体.
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